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无菌播种
2022-05-08

无菌播种

(一)实践目的

学习利用植物种子的胚轴进行愈伤组织培养的方法,主要是种子的无菌接种技术。

(二)实践地点和时间

植物组培室、建议4学时

(三)实践用具与材料

超净工作台、手术剪、枪状镊、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、植物种子、70%酒精、0.1%升汞、zt、2,4—d、大量元素、微量元素、琼脂、蔗糖

(四)实践内容

1、培养基制备

配制ms培养基:用大量元素、微量元素、维生素、铁盐配制,不加植物生长物质。

每升培养基加入30/l蔗糖、8g琼脂,将ph值调节到5.8。

2、高压灭菌

培养基入高压锅1.11-1.12pa下稳压灭菌23分钟,制备无菌水,同样高压灭菌30分钟,灭菌时将接种器械和纱布等放入高压锅一同灭菌。

3、无菌苗的制备

选择健康饱满的种子,流水下清洗干净,置超净工作台上。无菌水冲洗2-3次后,视材料情况,(较老较硬的种子)可剥离种皮后0.1%升汞灭菌,也可以(较嫩较软的种子)先灭菌后再用器械无菌剥离种皮。

4、无菌播种

剥离种皮的种子用无菌水2-3次冲洗后,接种到已制备的ms培养基中,每瓶培养基接种一粒。做好标记,置于培养室光下培养,以后一周随时观察生长状况。

5、清洁整理

清洁整理工作台和组培室,并将器械等工具清洗整理好以备下次实训使用。

(五)作业

写出下胚轴愈伤组织培养实践报告,并写明下胚轴愈伤组织培养的操作要领

(六)评分标准

无菌播种操作正确,成活率高,污染率小。

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